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PanaceaGel 3D细胞培养常见问题
浏览次数:4645 发布日期:2015-05-11

1 问:PanaceaGel是什么?

答:PanaceaGel是化学合成的肽水凝胶,PH为中性。该凝胶为透明、生物可降解、3D网络支架,不包含任何生物来源的成分,小瓶盛装。

 

2 问:PanaceaGel是什么材质的?

答:PanaceaGel100%是由13个天然氨基酸化学合成的肽。原子力显微镜(AFM)和电镜(SEM,TEM)观察也发现,水溶液中小肽根据天然3D网状结构自发组装成纳米纤维。由合成肽和碳酸钠调节水凝胶PH值,约8.5%的海藻糖作为等渗试剂调节渗透压。

3 问:PanaceaGel刚性如何?

答:随着肽浓度和混合物中盐浓度变化,PanaceaGel刚性不断变化。培养细胞分泌的细胞外基质也会影响其机械强度。例如流变学测量显示,以2:1的比例混合PanaceaGel0.4%)和DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium),储能模量(G’)和损耗模量(G’’)分别为97.0 ± 2.1 Pa 15.3 ± 1.4 Pa

4 问:PanaceaGel需要灭菌么?

答:发货前PanaceaGel已经经过高压灭菌。无需进一步灭菌。

 

5 问:如何储存PanaceaGel

答:PanaceaGel需在4-25℃避光保存。

 

6 问:室温条件下PanaceaGel稳定性如何?

答:未开封的PanaceaGel4-25℃时保存在黑暗处能放置6个月。长期稳定性研究正在进行中。

 

7 问:PanaceaGel应用于细胞悬液时需进行任何预处理么?

答:不需要。PanaceaGelPH为中性,所以用于细胞悬液时无需再平衡。二者极易混合,但液体混合时一定要迅速,因为PanaceaGel只要暴露于培养基中的盐中流动性就会大大降低。

8 问:PanaceaGel能用于何种细胞?

答:已经使用PanaceaGel成功培养了以下细胞:

小鼠骨骼肌细胞(C2C12)

大鼠骨骼肌细胞(L6)

小鼠成纤维细胞(NIH3T3)

人成纤维细胞(TIG-1)

人软骨肉瘤细胞(OUMS-27)

新生的心肌细胞(直接分离得到)

 

9 问:PanaceaGel和其他细胞三维培养材料有何异同?

答:参考下表

 

PanaceaGel

胶原Collagen

生物可降解聚合物


Biodegradable polymer

来源

合成

动物源性

合成

刚性

中等

中等


PH

中性

中性、酸性

中性

生物亲和性

良好

极佳

良好

透明度




 

10 问:实验中如何选择PanaceaGel使用浓度?

答:有两种浓度的PanaceaGel,分别为0.4%0.8%。初始实验,推荐将0.4%PanaceaGel和细胞悬液以1:1的比例等体积混合,获取PanaceaGel终浓度为0.2%0.8%PanaceaGel能用于制作更高硬度的水凝胶。根据细胞类型不同,PanaceaGel和细胞的最佳密度也不同。

11 问:在PanaceaGel中如何培养细胞?

答:参考试验步骤。

12 问:使用PanaceaGel时需要特殊装置么?

答:不需要

13 问:最佳生长条件和限制是什么?

答:细胞终浓度为1051×106cells/mL,对大多数类型细胞都可以选择普通培养基。PanaceaGel 3D培养细胞厚度不超过2mm

14 : PanaceaGel用过的细胞能再次培养么?

答:可以。破坏支架后通过移液能释放细胞并再次培养。

15 问:如何将生物活性物质整合到PanaceaGel中(小肽,生长因子等)?

答:生物活性物质能添加到培养基或细胞悬液中。如果加入培养基中,生物活性物质必须在30分钟内浸润并抵达细胞。若添加到细胞悬液中,需保持生物活性物质最适浓度。

16 问:能否在PanaceaGel表面培养细胞?

答:可以。添加细胞悬液前,PanaceaGel能包被培养皿、插件、孔板或其他细胞培养盘。加入细胞悬液时操作要轻柔,避免搅动。

17 问:PanaceaGel 3-D培养的细胞下游分析有哪些?

答:我们已成功进行过以下实验:

-DAPI PI或钙黄绿素染细胞测免疫活性

-荧光试剂染色后进行DNA 计数

-Western blot分析

-免疫染色

-SEM

-TEM

18 问:PanaceaGel3D 培养的细胞能移植到体内进行分析么?
答:满载细胞的PanaceaGel能植入活体动物组织中,进行专门活体研究。PanaceaGel本身是生物可降解的,体外研究中表明无毒性。

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